コロニー

ここに復帰した4月からずっと(諦めてやらなかった期間も長くあるけど)取り組んでいた実験にようやく光が見えたよ。
蛋白質発現用大腸菌のライゲーションとトランスフォーメーションと言って、ぱっとできれば一週間あればできる操作で、こうやって書くのもお恥ずかしい話なんだけどね。
でも、やっとライゲーションの女神様がこちらを向いてくれたようです(同じくこの操作に一年費やした経験のある後輩F君談)。

まだわからないけど、いつもとコロニーの様子が明らかに違う。今までは青白選択してもほぼ透明の小さいのしか出なかった、しかも、多くて10個。
今朝37度の装置を開けたら、いつもより大きな白コロニーが20個。今日のは青白選択できないベクターなので全て白色。
一昨日やったポジコンのトラフォも上手くできてたし、技術には問題なかったようだし、やっぱりインサートとベクターの濃度が重要だなぁ。今までできなかったのを合わせてみたら大分たくさんあることがわかって、それを全部集めてエタ沈してインサートを濃くできたんです。

あぁ、今日が金曜日でなければ、早いとこ培養してミニプレしてインサートチェックまで早くできるんだけどねぇ。3連休だから、今朝のコロニーが当たりか外れかわかるのは来週半ばになっちゃう。もどかし過ぎる。この忙しい時期にこのロスは痛いと思ってしまうけど、家族持ちには仕方ないな。休みの日はしっかりと休んで家族と時間を共にしないと。気ばかり急いてしまって、空回りそう。

そうならないようにと頑張ってきたけど、やっぱり週に二日(土日のこと)も丸々休んでては、本当に進まないなぁ。どうしても昔ばりばりやってた頃と比べちゃうよぉ。でも、昔はそうやって体壊したし、結局3年間休学したんだしね。
あぁ、でも…と葛藤が。

ミニプレ待たずにコロニーPCRしよう。でも、PCRだし、意外に信用できなくってねぇ。ノウハウがわかってから一度も失敗してないというH君に伝授してもらって今日やろうかなぁ。いつも早く来るんだけど、今日に限ってH君まだ来てないなぁ。早く来ないかなぁ。

っていうか、ブログ書いてないで早く論文書き進めないと。
はぁ、空回りそう。

今回のが当たりでありますように(-∧-；)

夕方追記：
外れでしたぁorz　ついにH君は来ず、昼過ぎに自分の方法でコロニーPCRを20個やったんだけど、出てなかった。プライマーはベクターのS-tagとインサートのリバースのを使ったから650 bp辺りに白いバンドが出ると願ってたんだけど、皆無でした。
だれかぁ、HELP!
マスタープレート作って今37度保温中だけど、捨てようかなぁ。明日Yさんに4度への移動頼んであるけど…。